本品采用了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，使用SARS-CoV-2 Spike蛋白基因替換逆轉(zhuǎn)錄病毒的包膜蛋白基因，與逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì)粒和CMV-GFP-T2A-Luciferase質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝含Spike蛋白突變位點(XBB.1.5)基因的假病毒，假病毒表面能表達SARS-CoV-2 Spike蛋白，并且病毒同時攜帶GFP和Luciferase熒光素酶報告基因，可通過觀察熒光信號和檢測熒光素酶活性評價假病毒感染細(xì)胞的活性，該假病毒無自主復(fù)制能力，安全性好，可用于SARS-CoV-2受體和藥物篩選、中和抗體檢測及疫苗效果評價等試驗。

XBB.1.5是以是以NCBI Reference Sequence: NC_045512.2中的Spike蛋白為假病毒刺突蛋白，具體突變位點為：T19I，LPP24-26del，A27S，V83A，G142D，Y144del，H146Q，Q183E，V213E，G252V，G339H，R346T，L368I，S371F，S373P，S375F，T376A，D405N，R408S，K417N， N440K，V445P，G446S，N460K，S477N，T478K，E484A，F(xiàn)486P，F(xiàn)490S，Q498R，N501Y，Y505H，D614G，H655Y，N679K，P681H，N764K，D796Y，Q954H，N969K。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		12024ES50	12024ES70	12024ES80
12024	COVID-19-Spike(XBB.1.5)Protein Pseudovirus	50 μL	4×50 μL	20×50 μL

 

運輸與保存方法

干冰運輸。-80℃保存，有效期6個月。本品應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。

 

注意事項

1、每批次病毒滴度均達到1×10⁶ TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具體病毒滴度請參考具體批次號COA。

2、凍融會導(dǎo)致假病毒穩(wěn)定性降低，從而影響核酸抽提效果和QPCR檢測結(jié)果，使用時應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、病毒操作時務(wù)必在二級或以上生物安全實驗室或生物安全柜中進行，不可使用普通超凈工作臺操作病毒。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服，戴口罩并戴一次性手套操作。

5、如果使用時本品不慎濺到眼睛、皮膚或其他身體部位，請立即使用大量清水沖洗。

6、使用本品所產(chǎn)生的實驗廢棄物需要通過高壓滅菌處理，按照醫(yī)療廢棄物處理要求進行處理。

7、本產(chǎn)品僅供科研使用。

 

使用方法

1、細(xì)胞鋪板：

實驗前一天，將待感染HEK293T-ACE2細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種量約為1×10⁴個細(xì)胞/孔，第二日，待細(xì)胞密度在30%左右時進行病毒感染。

2、假病毒感染：

取出凍存的假病毒置于冰上融化或4℃條件下待其完全融化后，設(shè)計濃度梯度（一般需要設(shè)計3個濃度梯度），加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中感染目的細(xì)胞。以HEK293T- ACE2細(xì)胞為例，加入病毒量約為0.1-1 μL/孔，病毒感染6h后更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

3、感染檢測：

細(xì)胞感染假病毒換液48h后，通過熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達并檢測熒光素酶的活性以判定感染效率（假病毒對不同細(xì)胞的感染效率不同，正式實驗前建議進行預(yù)實驗，以確定最合適病毒添加量）。

HB230110